产品货号：
BTN80804
中文名称：
柱式真菌RNA提取试剂盒
英文名称：
Fungal RNA Column extraction kit
产品规格：
50次
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本产品是专门用于真菌RNA的纯化的试剂盒，采用非酶细胞破裂法，适用于各种形态和各个种属的真菌，包括Candida albican、Saccharomyces cerevisiae、Schizosaccharomycespombe、Pichiapastoris等。提取得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern杂交、microarray hybridization、cDNA合成等实验。
保存：室温，有效期一年。
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- 柱式操作，更加简单快捷，整个过程只需要约30分钟。
- RNA纯度高，OD260/280一般都在2.0左右。
- RNA产量高，一般在20～70μg/mL酵母培养物(约2.0×107个细胞)。
- 本产品只能用于科研。
| 成分 | 规格 |
| 真菌RNA纯化溶液A | 20mL |
| 真菌RNA纯化溶液B | 25mL |
| 真菌RNA纯化溶液C | 75mL |
| 真菌RNA纯化溶液D | 25mL |
| 离心吸附柱 | 50套 |
| 通用洗柱液 | 50mL |
| RNA洗脱液 | 10mL |
保存：室温，有效期一年。
- 将50mg左右的干菌丝(或100mg左右的鲜菌丝、或适当数量的真菌菌落)转移到1.5mL塑料离心管中。如果是液体真菌培养物，则直接将1～10mL液体真菌在1.5mL塑料离心管中12000～15000g离心1分钟，并弃尽液体培养基（可以分多次离心）。
- 加入0.4mL真菌RNA纯化溶液A并充分吹打混匀。如果真菌RNA纯化溶液A存放时产生沉淀，请置于65℃融化，用前充分摇晃均匀。
- 加入0.4mL溶液B，剧烈振荡30秒。
- 65℃保温5分钟。
- 室温12000～15000g离心3～5分钟，转移上清到一干净的1.5mL塑料离心管中。
- 再加入0.1mL真菌RNA纯化溶液B和0.1mL自备氯仿，振荡混匀30秒。
- 室温12000～15000g离心3～5分钟，转移上清到一自备的、干净的5mL塑料离心管中。
- 加入相当于上清3倍体积的真菌RNA纯化溶液C（约1.2～1.5mL）和1倍体积的溶液D（约0.4～0.5mL），充分混匀。
- 将混合液（约2.5mL）分3～4次转移到离心吸附柱中。每次13000～15000g室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
- 用0.5mL通用洗柱液到离心吸附柱中，室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
- 一次洗涤一般足够去除杂质。但如果样品OD260/280比值不高，可以再用0.5mL通用洗柱液重复此步一次。
- 室温离心半分钟。此步十分重要，否则残留的洗柱液会影响RNA的使用。
- 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free 1.5mL塑料离心管中，加入30～100μL RNA洗脱液。
- 室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
- RNA完整性的电泳检测：
如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳应。 - RNA产量产率测定：
将5～10μL RNA溶于TE缓冲液中(pH7.5～8.2之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度（1 OD260的RNA=40μg/mL），进而计算出RNA的产量（浓度×体积)和产率(RNA产量/真菌用量)。注意不要将RNA稀释在DEPC水中检测OD260和OD280，否则光吸收比在TE中测得的低10%～15%。 - RNA纯度测定：
无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8～2.1之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，OD260/OD230一般在2.0～2.3之间，如果低于或高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质或多糖的污染，但一般不影响RT-PCR等反应。蛋白质污染可以通过酚/氯仿抽提一次然后酒精沉淀去除，DNA和多糖污染可以分别用多糖清除剂去除。测OD时RNA不能过度稀释使OD读数低于仪器的有效范围，如果低于一起的检测范围，该读数无效。
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